昆明石杉,系石杉科石杉属植物，为我国特有种，首要散布于云南、贵州等地，生于灌木下、苔藓丛中。20世纪80年代，我国科学工作者从同属植物蛇足石杉中别离到石杉碱甲(Hup-A)，并说明它是一种可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂，对医治重症肌无力、记忆力减退和早老年痴呆具有较好的作用，现已被广泛应用于临床。为了科学、合理地使用石杉属植物资源，本试验初次选用HPLC法对昆明石杉中石杉碱甲的含量进行测定，为寻觅和挑选石杉碱甲新的植物资源供给科学依据。
1、仪器与试药
Aigent1100型HPLC色谱仪(带四元泵，自动进样器，紫外检测器等);电子剖析天平(日本岛津);KQ50B超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);电热恒温水浴锅(上海医疗器械厂);石杉碱甲对照品(我国药品生物制品检定所，批号：100243-200401);乙腈(色谱纯);二次重蒸水;其他试剂均为剖析纯。
试验药材采至贵州黔东南，由贵州科学院生物研究所王培善教授鉴定为昆明石杉H.kunmingensisChing.，标本存放于贵阳中医学院民族医药研究所，标本凭据(20056)。
2、办法与成果
2.1色谱条件
ZORBAXSB-C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)，活动相0.02mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(92∶8)，检测波长为310nm，流速1ml·min-1，柱温25℃，进样量为5μl。在此色谱条件下，样品中的石杉碱甲与其他峰能到达基线别离，其理论塔板数为4656，对称因子为0.92。石杉碱甲的保存时刻为11.15min，对照品与样品的色谱图见图1。
2.2样品的制备
精细称取试验药材细粉2g于500ml的圆底烧瓶中，每次参加200ml石油醚提取3次，弃去滤液。滤渣再用95%的甲醇提取3次，兼并滤液并收回溶剂，参加2%的酒石酸溶解，用氨水调理pH值至8.0，再用氯仿萃取至Dragendorffors反响呈阴性，挥干有机溶剂，用无水乙醇溶解并定容至25ml即得。
2.3线性关系的调查
精细称取石杉碱甲对照品2.40mg于25ml容量瓶中以无水乙醇溶解并定容，得浓度为0.096mg·ml-1对照品溶液，再别离稀释成0.096，0.048，0.024，0.012，0.006，0.003mg·ml-1的对照品供试液，在色谱条件下测定。以进样浓度对峰面积进行回归，得方程：Y=6776.0151X1.0305，r=0.99995。可知石杉碱甲在0.015～0.48μg之间与峰面积呈杰出线性关系。
2.4精细度试验
取石杉碱甲对照溶液，在色谱条件下重复进样6次，成果石杉碱甲峰面积的RSD为0.36%(n=6)。
2.5安稳性试验
取供试品溶液，每隔2h测定1次，调查石杉碱甲的含量改变，成果含量的RSD为0.85%(n=6)，标明供试品在10h内安稳。
2.6重复性试验
称样品6份，按“2.2”项的要求制备6份供试液，在色谱条件下别离进行测定，成果Hup-A含量的RSD为0.60%(n=6)。
2.7收回率
试验精细称取昆明石杉药材细粉6份，每份1g，别离参加对照品供试液(0.003mg·ml-1)100ml，按样品制备办法和色谱条件，制备加样收回供试液进行测定，核算收回率(见表1)。成果石杉碱甲的均匀收回率为99.63%，RSD=0.56%(n=6)。表1石杉碱甲加样收回率试验成果(略)
2.8样品的测定
按“2.2”项的要求精细称取样品3份，制备供试液，按色谱条件进行测定，重复3次，取均匀值，石杉碱甲在原植物中的均匀含量为0.03%。
3、评论
初次选用HPLC法测定昆明石杉中石杉碱甲的含量。
测定办法是在其它石杉中石杉碱甲含量测定办法的基础上，改用ZORBAXSB-C18色谱柱及以0.02mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(92∶8)为活动相。试验证明该办法易行、活络、精确、牢靠。在同科属植物中，昆明石杉是石杉碱甲含量相对较高的一个植物种类，到达0.03%。
