感染时初始CD8+T细胞被激活、增殖分解为效应CD8+T细胞，并随同体温升高。要知道体温升高是否会进一步调控CD8+T细胞的激活分解，首要要处理对T细胞激活分解进程中的形状学改动进行定量剖析。
Amnis公司ImageStream高内在显微成像流式细胞仪结合荧光显微镜和流式细胞仪的长处，可在快速剖析很多细胞的一起取得每个细胞的图画，进行客观定量的剖析。咱们知道，发烧的时分是机体正在对外来病原菌进行反抗。以往咱们仅仅知道高温可以按捺病原菌的仿制才能。可是来自于美国纽约的罗兹韦尔公园癌症研讨所(RPCI)的免疫与流式细胞仪研讨组近来的研讨标明，发烧还可以进步免疫体系的功用，确切的说，是CD8+T细胞的功用[Thomas A. Mace, JLB,2011]。
在这篇研讨中，美国Amnis公司的ImageStream高内在显微成像流式细胞仪发挥了不可估量的效果，不只完美的处理了传统的流式剖析和传统图画调查的技能瓶颈，而且其强壮的图画定量剖析才能也使之成为免疫学研讨的利器。在炎症或许遭到病原菌侵染的时分，初始CD8+T细胞经过与APC细胞相互效果而被激活，然后增值、分解为效应CD8+T细胞，此激活进程可能会随同着体温的升高。可是人们仍不了解体温的升高是否又会进一步调控CD8+T细胞的激活和分解。
要处理这一问题，首要要处理的是怎么对T细胞的激活和分解进程中的形状学改动进行定量剖析。而美国Amnis公司推出的ImageStream高内在显微成像流式细胞仪使得这一问题方便的处理：该体系结合了荧光显微镜和流式细胞仪的长处，可以在快速剖析很多的细胞的一起取得每个细胞的图画，并可以对这些图画进行客观、定量的剖析。
近来，美国纽约的罗兹韦尔公园癌症研讨所《白细胞生物学杂志》杂志上宣布了他们的研讨成果：研讨者使用ImageStream高内在显微成像流式细胞仪对较低体温(33°C和37°C)以及较高体温(39.5°C)下小鼠CD8+T细胞与APC细胞的结合状况进行了定量剖析，成果标明，体温升高后增强了二者的结合率。
别的更重要的是，研讨者还发现试验组小鼠CD8+T细胞数量明显添加，而且其膜外表的GM1以及CD8共受体聚集成簇然后影响了膜的流动性。这些成果提醒了发烧引起的体温添加可以经过进步效应细胞集体的数量来影响抗原特异性CD8+T细胞所调理的应激效应。在该研讨中，ImageStream显现了其强壮的图画定量剖析才能。
研讨者首要从试验小鼠体内分离了初始CD8+T细胞，然后分别在33°C、37°C以及39.5°C孵育6小时后，经过用ImageStream剖析其细胞膜的流动性。由于ImageStream可以对检测到细胞进行成像，所以可以直观的显现出FITC符号的GM1蛋白均匀散布或成簇散布的状况(图1B)。
经过软件对整个集体细胞进行定量的图画剖析，研讨者使用ImageStream软件中的BrightDetail Intensity参数对细胞进行剖析，发现温度升高至39.5°C后细胞膜外表的GM1成簇现象明显添加(图1C)。别的，有报导标明T细胞激活时TCR信号复合体也会在细胞膜外表成簇。因而，研讨者也对该复合体进行了剖析，相同取得了相似的成果(图1G和图H)。
为了检测温度是否会影响CD8+T细胞与APC细胞二连体的构成，研讨者将初始CD8+T细胞分别在37°或39.5°C 孵育6小时，然后和C57BL/6脾细胞共培育，试验组用gp10025-33多肽处理。最终用ImageStream对产生免疫突触的二连体细胞的数量进行剖析。
首要经过明场和Aspect Ratio(细胞的短轴/长轴)设门区别单细胞和二连体细胞(图2A和B，R1为单细胞，R2为二连体细胞)，然后经过CD8+Thy1.1+ (即 CD8+ T cells)和CD11b+ (即APC) 的表达进行设门圈选出T细胞和APC的双联体细胞(图2C)。试验成果标明，温度的升高使CD8+T细胞与APC二连体细胞的份额明显添加(图2D)。
图2.温度的升高导致CD8+T细胞和APC细胞的二连体的份额添加
接下来，研讨者期望探求CD8+T细胞的共受体是否也会跟着温度的添加而聚集成簇。该共受体分子也和TCRβ相同，是对CD8+T细胞激活十分重要的分子。经过研讨证明了作者的猜想(图3A和3B)。
图3.小鼠的升高导致CD8+T细胞膜外表共受体成簇份额添加
一起研讨者还使用ImageStream软件中的Similarity参数对CD8共受体与GM1在细胞膜共定位状况进行了剖析，可是成果标明小鼠体温添加前后的similarity值没有差异(数据未显现)。为了进一步研讨GM1在T细胞中的成簇状况，研讨者剖析了GM1和阴性对照CD71的共定位状况，成果标明在小鼠体温添加前后similarity的值有所下降(右图C和D)。图画显现CD71分子在小鼠体温升高后并没有和GM1共成簇(cocluster)，如右图E所示。
最终，研讨者以为CD8+T细胞及其分解为效应细胞的进程是对温度灵敏的。假如CD8+T细胞先处于较高的温度下，然后接遭到抗原刺激时会愈加快速和有用的作出呼应。在此类免疫学研讨中，研讨者遇到的最大的技能瓶颈便是怎么对很多的细胞图画进行定量剖析而且取得具有计算学含义的数据—由于传统的流式细胞仪无法取得细胞的形状学信息，而选用荧光显微镜需求经过人为进行判别剖析，计算的细胞数量十分有限。而美国Amnis公司推出的ImageStream高内在显微成像流式细胞仪完美的处理了这一问题，可以快速、客观的对蛋白转位、分子共定位、形状改动、分子内吞、免疫突触构成等形状学进行定量剖析。
