依据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，使用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。依据朗伯-比尔规律，某有色溶液的吸光度A与其间溶质浓度C和液层厚度L成正比，即
A＝αCL
式中：α份额常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。假如溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这便是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并依据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了扫除类胡萝卜素的搅扰，所用单色光的波长挑选叶绿素在红光区的最大吸收峰。
